组织培养(组织培养的步骤是怎样的？)

什么是组织培养？

通过无菌操作将植物体的一部分即外植体接种到培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其产生完整新植株的过程，叫组织培养。

组织培养的步骤是怎样的？

组织培养步骤：组织培养按以下程序进行：取材（5毫米大小）→材料用0.1%氯化汞（HgCl）消毒10分钟→制备外植体（3～5毫米大小）→接种（无菌操作）→增殖培养（25℃）→诱导不定根→炼苗→移栽。

操作过程始终在无菌条件下进行，外植体消毒要彻底，但不过分伤害其组织，整个过程严把无菌关。组织分化的控制:利用植物体的一小块组织培育出一棵完整的植株，需要经过细胞的分裂、生长和分化，包括组织和器官的生长和分化，这一系列的变化都是在植物激素的调控下进行的。在组织培养中使用的植物生长调节物质主要有生长素类，如吲哚丁酸、萘乙酸、吲哚乙酸等，这些激素类物质的作用是调控组织培养的材料向根的方向分化。细胞分裂素类，如6-苄基腺嘌呤（6-BA）、玉米素（Zitine）等，这类激素物质的作用是调控组织培养的材料向茎、芽的方向分化。生长素类激素与细胞分裂素两类激素的比例，控制着细胞和组织的分化方向。在组织培养中，常用6-苄基腺嘌呤1～2毫克/升诱导形成芽，而用萘乙酸0.5～1.0毫克/升和6-苄基腺嘌呤0.05～0.20毫克/升诱导形成根。

什么是组织培养

组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。 植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。

分类

按外植体分，植物组织培养可分以下几类：

1、胚胎培养植物的胚胎培养，包括胚培养、胚乳培养、胚珠和子房培养，以及离体受精的胚胎培养技术等。

2、器官和组织培养器官培养是指植物某一器官的全部或部分或器官原基的培养，包括茎段、茎尖、块茎、球茎、叶片、花序、花瓣、子房、花药、花托、果实、种子等。组织培养有广义和狭义之分。广义：包括各种类型外植体的培养。狭义：包括形成层组织、分生组织、表皮组织、薄壁组织和各种器官组织，以及其培养产生的愈伤组织。

3、细胞培养细胞培养包括利用生物反应器进行的，旨在促进细胞生长和生物合成的大量培养系统和利用单细胞克隆技术促进细胞生长、分化直至形成完整植株的单细胞培养。

4、原生质体培养植物原生质体是被去掉细胞壁的由质膜包裹的、具有生活力的裸细胞。

什么是组织培养

组织培养就是在无菌的情况下，将植物体内的某一部分器官或组织，如茎尖、芽尖、形成层、根尖、胚芽和茎的髓组织等从植物体上分离下来，放在适宜培养基上培养，经过一段时间的生长、分化最后长成一个完整的植株

组织培养是加速植物繁殖、创造优良品种的一种行之有效的方法

它可以为农业生产提供许多优良的新品种，也为农业生产工厂化提供了一个广阔的前景

组织培养之所以能成功，主要在于植物的再生能力和植物细胞的全能性

高等植物的再生能力是普遍存在的，如柳枝的插条能成活，收割后的稻茬能长出新稻等都是再生现象

离体组织只要供应充足的营养，适宜的温度和湿度，保证光照和不受杂菌污染，完全可以长成一株完整的幼苗

从植物的单个细胞来看

一个植物体内的所有细胞都含有母体的全套遗传信息，每个细胞都有发育成完整植物的特性

植物细胞的这种特性就称为细胞的全能性

植物物体内的所有活细胞都具有这种能力

组织培养对所需的培养基要求是极其严格的

这种培养基含有糖、氨基酸和各种矿物质，以及适量的不同比例的各种植物激素

不同的植物器官和组织，甚至不同发育时期和不同年龄的同一器官所需的培养基都不同

利用组织培养法培养出的植株，第一阶段都必须经过试管培养阶段，所以利用此法培养出的植株又称为“试管植物”

什么是组织培养？

植物组织培养，即植物无菌培养技术，是利用植物体离体的器官、组织或细胞，在无菌和适宜的人工培养基及光、温等条件下进行人工培养，使其增殖、生长、发育而形成完整的植物，是植物细胞具有全能性的表现

培养的离体材料称为外植体

植物组织培养根据外植体的不同，可分为胚胎培养、器官培养、组织培养（含愈伤组织）、细胞培养、原生质体培养和细胞杂交等

根据培养的操作方式不同，又可分为固体培养和液体培养

液体培养又分振荡培养、旋转培养和静止培养等

组织培养是什么？

组织培养（tissue

culture)又称体外实验（in

vitro)。

无菌条件下，将从机体取得的组织块或细胞置于体外的模拟体内各种条件下进行培养，培养条件包括适宜的营养液、o2、co2、ph值、渗透压与温度等，还要防止微生物污染。可在倒置相差显微镜下直接观察生活级胞的运动、增殖、分化、吞噬等动态变化，并可用显微摄相、显微摄电影或显微录像等真实记录下生活细胞连续变化的过程强。

该技术是一种比较简便、反应敏锐的实用方法，目前已建立多种细胞株，并已广泛用于实验研究。也可应用组织培养细胞研究各种物理、化学及生物因素对细胞的直接作用。组织培养术与上述各种技术密切配合,可获得单纯从体内实验难以达到的效果。

怎样进行组织培养？

（1）器具的消毒。组培前玻璃器皿等要用洗衣粉刷洗干净备用。接种室和超净工作台用70%酒精擦洗，并用紫外光照射。其他用具也要进行高温消毒。

（2）培养材料的采集。组培所用的植物材料可采用根、茎、叶、花、芽及种子的子叶、胚轴的一部分，有时也可利用花粉或花药。通常应取初生幼嫩的材料，这些材料在移入培养基时都必须保持鲜嫩状态，否则组培将会失败。

（3）培养材料的消毒。先将采集来的材料用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗2～3遍，然后用无菌纱布将材料上的水分吸干，切成小块，放入70%酒精中浸泡15～30秒，再用30%漂白粉澄清液浸泡20分钟消毒，最后用无菌水冲洗3～5遍。

（4）制备外植体。将上述经过灭菌的材料，用在火焰上消过毒的刀、剪、镊，在消毒滤纸上剥去芽的鳞片，嫩枝的外皮和种皮胚乳等，然后切成长0.2～0.5厘米的小片（这些小片就是外植体）。在操作过程中，严禁用手触动这些材料。

（5）接种培养。在无菌条件下将切好的外植体立即接种在培养基上。接种后所用试管和三角瓶都要用无菌药棉封口，放培养室培养架上培养。每天用日光灯照12～16小时。保持在25℃±20℃。也可采用变温培养，夜间温度略低于白天。

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